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    ELISA實驗可能出現(xiàn)的11個問題及原因分析
    更新時間:2025-06-24瀏覽:113次

      ELISA實驗可能出現(xiàn)的11個問題及原因分析

      以下是天津本生ELISA實驗中可能出現(xiàn)的11個常見問題及其原因分析,綜合多個專業(yè)來源整理:

      一、顯色弱或無信號

      試劑活性降低?

      運輸/保存溫度過高或試劑過期導致酶失活

      孵育條件不當?

      溫度未達37℃或時間不足,抗原抗體結(jié)合不充分

      加樣誤差?

      移液器不準、吸頭殘留液體或加樣速度過快導致量不足

      二、高背景/假陽性

      洗滌不凈?

      洗液量不足、洗板針堵塞或浸泡時間過短,未結(jié)合物質(zhì)殘留

      非特異性結(jié)合?

      封閉不充分或樣本中血紅蛋白/細菌污染干擾

      孵育過度?

      溫育時間過長或溫度過高

      三、白板(全板無顯色)

      試劑錯用?

      誤將終止液當作洗滌液或漏加酶標抗體

      底物失效?

      TMB/H2O2配制過久或未避光保存

      四、重復性差(CV>15%)

      操作不一致?

      加樣時間/速度差異大或復孔間洗滌力度不均

      移液器誤差?

      槍頭密封性差或未校準導致加樣量波動

      五、標準曲線異常

      稀釋錯誤?

      標準品復溶不充分或梯度稀釋比例錯誤

      孔間污染?

      加樣時液體濺灑或槍頭交叉使用

      六、陰性對照顯陽性

      交叉污染?

      樣本/試劑污染或洗板不凈

      封閉失效?

      封閉液濃度不足或孵育時間過短

      七、顯色過快/過慢

      酶濃度異常?

      HRP標記抗體過量或失活

      環(huán)境干擾?

      室溫過高或底物接觸金屬器械

      八、孔間顯色不均

      液體蒸發(fā)?

      孵育時未貼封板膜導致邊緣孔干燥

      氣泡干擾?

      加樣時產(chǎn)生氣泡影響反應界面

      九、樣本檢測值異常

      預處理不當?

      溶血、脂血或反復凍融破壞靶標

      稀釋錯誤?

      未預實驗確定合適稀釋倍數(shù)

      十、酶標板花板

      纖維蛋白殘留?

      血清未充分凝固或離心不凈

      洗板沖擊力不足?

      手工洗板時液體未垂直注入孔底

      十一、讀值漂移

      終止后延遲?

      加終止液超過15分鐘未讀板

      波長設置錯誤?

      酶標儀未調(diào)至TMB最佳吸收峰(450nm)

      建議實驗前嚴格檢查試劑狀態(tài)、校準儀器,并設置合理的質(zhì)控對照。若問題持續(xù),可聯(lián)系試劑廠商獲取技術(shù)支持。

      注:以上資料僅供參考,具體請咨詢技術(shù)老師或品牌供應商。

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